首頁

下游實驗

腺病毒ADV

腺病毒ADV


        腺病毒(Adenovirus, ADV)是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒,具有廣泛的細胞和組織感染能力。感染過程劇烈,適于短時間內進行基因高表達的實驗,與其它病毒相比,腺病毒最大優勢在于插入片段較長,表達活性強。

        體外應用時,腺病毒載體轉基因效率高(接近100%的轉導效率),且可轉導不同類型的細胞,對于大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好的工具。但是,在體內應用時,由于腺病毒免疫原性強,感染劇烈,故常會引起動物局部組織炎癥反應和機體免疫反應,對動物體征和實驗結果的客觀性造成影響。


腺病毒包裝與純化

  腺病毒包裝中表達質粒與穿梭質粒共轉染293T細胞,待細胞出現CPE狀態后通過收集和過濾細胞裂解物而純化。

       CPE(Cytopathic Effect):病毒對組織培養細胞侵染后產生的細胞變性,利用此種病變效應可進行病毒定量。


腺病毒滴度檢測

  檢測方法:酶聯免疫法腺病毒滴度測定,根據計算感染后染成褐色的陽性細胞數,來計算病毒滴度

  實驗原理:腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成褐色

       檢測方法:免疫顯色方法。

  實驗原理:通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與感染腺病毒樣品的細胞結合,再用HRP標記的二抗與一抗結合,經顯色液顯色,被感染的細胞變成褐色,根據陽性細胞數,來計算病毒滴度。


腺病毒載體優勢

① 表達快,腺病毒感染細胞后,1-2天即可表達

② 載體容量大,感染效率高,常用于感染難感染的細胞

③ 不整合到染色體中,無插入致突變性

④  具有嗜肝性,易于感染肝細胞,腺病毒的體內應用通過是用于感染肝臟

  不過由于腺病毒免疫原性高,對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎癥,體內應用需謹慎。

 

載體選擇

   聯川生物合作公司——和元上海擁有豐富的腺病毒產品,用于操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。以下腺病毒載體可供您選擇:



應用實例

  1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝臟]


  注射部位:肝臟

  載體名稱:Ad-CBS

       注射方式:尾靜脈

       注射量:10ul,1 x1011PFU/mL

       檢測時間:1周


  2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝臟]

  

        注射部位:肝臟

        載體名稱:Ad-ATG7

        注射方式:尾靜脈

        注射量:1 x109PFU /mice

        檢測時間:10天


  3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]

 

        注射部位:大鼠大腦皮層

        載體名稱:Ad-FBLN

        注射方式:腦立體定位注射

        注射量:三種不同劑量

        檢測時間:7天


  

        和元生物腺病毒的生產和指控采取了國際學術界公認的標準流程,采用二質粒系統在293細胞中進行包裝。所獲得的病毒顆粒經過超速梯度離心和過濾,并通過殼蛋白免疫法進行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以滿足各類實驗的使用要求。



杭州聯川生物技術股份有限公司. All Rights Reserved.
浙ICP備15020535號
pk10手机开奖视频